Mes: octubre 2018

Los animales modificados genéticamente (AMG) son una herramienta ampliamente utilizada en la investigación biomédica, ya que permiten modelar enfermedades, estudiar las bases moleculares de las condiciones patológicas, identificar y validar nuevos blancos farmacológicos, y estudiar la farmacocinética y toxicidad de los fármacos. Los AMG pueden sobreexpresar un gen foráneo (animal transgénico), tener interrumpida la expresión de un gen (knock-out), o tener reemplazado un gen en particular (knock-in). El ratón es el animal de laboratorio de elección para la generación de AMG, principalmente por la facilidad con que es posible modificarlo genéticamente y su bajo costo económico de mantención.

Entre los avances más destacados del último tiempo en las técnicas de ingeniería genética, esta la introducción de mutaciones célula o tejido-específico, los cambios en el genoma del ratón que pueden inducirse o reprimirse en un momento puntual de la vida del animal, y la sustitución de genes del ratón por su ortólogo humano. Las limitaciones tecnológicas para producir modelos de ratones manipulados genéticamente son cada vez menores, mientras que las aplicaciones y ejemplos de usos de estos animales en farmacología, que podemos encontrar en la literatura, son cada vez mayores. Por lo tanto, entender lo que se requiere experimentalmente para responder una pregunta científica es tan importante, como conocer las herramientas biotecnológicas disponibles en el mercado. Esta revisión no tiene otro fin que informar de manera general los tipos de AMG que existen y ejemplificar los usos de estos en la investigación farmacológica.

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Las estatinas son fármacos muy usados en el control de las dislipidemias y en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares que tienen como sustrato una lesión ateroesclerótica. Además las estatinas poseen múltiples actividades ateroprotectoras, tales como: mejorar la disfunción endotelial, inhibir la inflamación vascular, inhibir la trombosis y disminuir el estrés oxidativo. Estas acciones se conocen como “efectos pleiotrópicos” de las estatinas.

Por otra parte existen variadas evidencias que demuestran la similitud entre aterosclerosis y artritis reumatoide basada en la activación de redes celulares del sistema inmune. En ambas patologías, los macrófagos son activados para producir TNF-α, interleucinas, metaloproteinas de matriz. Además, se elevan los niveles de PCR y endotelinas. Se secretan enzimas que alteran la síntesis del colágenos y que, por tanto, desestabilizan la placa aterosclerótica como las estructuras articulares. Por estos antecedentes, es razonable asumir que las estatinas pueden jugar un rol antinociceptivo o analgésico en ciertas condiciones de dolor acompoañado de inflamación, ya sean agudas o crónicas. Por las múltiples razones éticas, es prácticamente imposible realizar experimentos preclínicos de dolor en el hombre, por lo cual se han diseñados diferentes modelos algesiométricos animales, especialmente en roedores y de ellos los ensayos en ratones son muy útiles.

Existen modelos de injuria tisular en animales, que permiten inducir dolores, tanto agudo como crónico, que se reflejan en peculiares comportamientos del animal. Entre los diversos modelos existen de tipo tónico (la formalina orofacial; la contracción abdominal inducida por ácido acético, etc) y de tipo fásico (el movimiento de la cola, el ensayo de la plancha caliente, etc). La administración, en ratones, por via oral de atorvastatina de 3, 10, 30 o 100 mg/kg por 1 día o por 3 días consecutivos indujo una actividad antinociceptiva dosis dependiente en el test de las contorsiones abdominales producidas por la administración intraperitoneal de una solución de ácido acético al 0.6% (writhing test). Similar tratamiento produjo igual tipo de antinocicepción en el ensayo del movimiento de la cola (tail-flick) y en el ensayo de 20 μl la una solución de formalina al 2 % inyectada subcutáneamente en la cara dorsal de la pata trasera, tanto en la fase de algesia aguda (FaseI), como en la fase inflamatoria (Fase II).

En el modelo de la formalina orofacial que se obtiene por la administración de 20 μl de formalina al 2% por via subcutánea en el labio superior del ratón, se produjo una significativa reducción del efecto algésico de la formalina, tanto en la fase I (algésica aguda) como en la fase II (inflamatoria). Sin embargo, en el ensayo de la plancha caliente (hot-plate), la administración oral de atorvastatina, solo en dosis alta (100 mg/kg) producen un efecto antinociceptivo tras la administración de la estatina por 1 día y por 3 días. Similar administración simvastatina en dosis de 3, 10, 30 o 100 mg/kg por 1 día o por 3 días consecutivos inducen un efecto analgésico dosis dependiente en los mismo test en que se evaluó la atorvastatina. Los resultados obtenidos con atorvastatina o con simvastatina en los diferentes ensayos algesiométricos de dolor tónico o fásico, demuestran un efecto antinociceptivo y anti-inflamatorio de las estatinas. Estas acciones podrían estar relacionadas con la inhibición de las citocinas y/o la liberación de prostanoides, como la estimulación de la síntesis de óxido nítrico, como también con la inhibición de la expresión de las ciclooxigenasas-2. Debe considerarse además sus efectos immunomodulatorios y una posible acción antinociceptiva directa sobre los nociceptores. Todas estas acciones ya han sido descritas entre los efectos pleiotrópicos para estos fármacos.

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La bioequivalencia es el procedimiento que utilizando elementos de la farmacocinética clásica, específicamente aquellos parámetros que describen cuantitativamente el proceso de absorción de un fármaco desde una forma farmacéutica de administración oral, permiten establecer, por medio de la comparación de estos parámetros, si un medicamento determinado se comporta de manera similar, in vivo, a uno que actúa o se define como gold standard o comparador. Para estos propósitos, generalmente se emplea como producto comparador aquel que ha demostrado eficacia y seguridad y que ha completado satisfactoriamente todas las fases preclínicas y clínicas, antes de su distribución y comercialización del producto farmacéutico. Los parámetros farmacocinéticos que tradicionalmente se emplean para realizar la comparación son el área bajo la curva de la concentración del fármaco en sangre en función del tiempo (ABC o AUC de su sigla en inglés), la concentración plasmática máxima luego de la administración (Cmáx) y el tiempo que transcurre para alcanzar dicha concentración (Tmax).

El cálculo de estos parámetros se realiza a través de la ejecución de las fases clínicas de los estudios, en donde se emplean voluntarios sanos en número suficiente de acuerdo a las características farmacocinéticas del principio activo para el cual se mide la bioequivalencia (variabilidad farmacocinética entre o intrapacientes). Posteriormente, los parámetros se calculan a partir del tratamiento farmacocinético de las concentraciones plasmáticas de fármaco obtenida en los voluntarios sanos. La similitud o no de los parámetros obtenidos tanto del producto que desea demostrar la bioequivalencia como con el producto comparador, se determina durante la fase estadística de los estudios, en donde se establecen intervalos de confianza para la comparación de los parámetros mencionados y el análisis de varianza de los mismos, para definir si ambos productos son comparables, desde el punto de vista estadístico, y por tanto concluir si pueden ser considerados bioequivalentes.

El camino de la bioequivalencia en Chile no ha estado exento de dificultades, puesto que una de las condiciones sine qua non antes de aceptar un estudio, es que los procesos de manufactura estén validados, esto es, controlados y sean reproducibles entre los distintos lote de productos fabricados. Actualmente, existen 57 productos farmacéuticos para los cuales se ha certificado la bioequivalencia ante el Instituto de Salud Pública de Chile y se espera que para finales del 2012, dicha cantidad se incremente a 221 productos. Esto constituye un avance importante respecto de la situación de exigencia de bioequivalencia, cuando se compara con otros países de la región, si se considera que la promulgación de la norma recién se aprobó el 2005 y la materialización de la exigencia comenzó a mediados del 2008, con la publicación de las guías técnicas, que describen cómo ejecutar los estudios y de los formularios de presentación de protocolos y resultados de estudio, para el ingreso de los antecedentes ante la autoridad sanitaria. De esta forma se puede afirmar que aunque no exenta de dificultades, la bioequivalencia se ha instalado como tema entre las empresas farmacéuticas, los profesionales de la salud y finalmente y más importante aún, entre los pacientes, que tendrán la oportunidad de acceder a medicamentos más baratos, pero con calidad biofarmacéutica certificada.

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